发布文号: 国食药监许[2011]96号
1 范围
本方法规定了测定香水、发胶、指甲油等化妆品中10种邻苯二甲酸酯类化合物的高效液相色谱法。
本方法适用于香水、发胶、指甲油等化妆品中10种邻苯二甲酸酯类化合物的含量测定。
本方法所指的10种邻苯二甲酸酯类化合物包括邻苯二甲酸二甲酯（dmp）、邻苯二甲酸二乙酯 （dep）、邻苯二甲酸二正丙酯（dpp）、邻苯二甲酸二正丁酯（dbp）、邻苯二甲酸二正戊酯（dap）、邻苯二甲酸二正己酯（dhp）、邻苯二甲酸丁基苄酯（bbp）、邻苯二甲酸二环己酯（dchp）、邻苯二甲酸二正辛酯（dop）和邻苯二甲酸二异辛酯（dehp）。
本方法中各种邻苯二甲酸酯类化合物的检出限及取1g样品时的检出浓度见表1。
表1 各种邻苯二甲酸酯类化合物的检出限和检出浓度
|
物质名称 |
dmp |
dep |
dpp |
bbp |
dbp |
dap |
dchp |
dhp |
dehp |
dop |
|
检出限 / ng |
0. 5 |
0. 5 |
3 |
3 |
3 |
40 |
40 |
40 |
5 |
5 |
|
定量下限 / ng |
2 |
2 |
10 |
10 |
10 |
135 |
135 |
135 |
20 |
20 |
|
检出浓度 /（mg/g） |
1 |
1 |
5 |
5 |
5 |
70 |
70 |
70 |
10 |
10 |
|
最低定量浓度 /（mg/g） |
4 |
4 |
20 |
20 |
20 |
270 |
270 |
270 |
40 |
40 |
2 原理
邻苯二甲酸酯类化合物在280nm处有特征紫外吸收，可用反相高效液相色谱（hplc）分离，并根据保留时间和紫外光谱图定性，峰面积定量。
3 试剂
3.1 甲醇，色谱纯。（溶剂应不含邻苯二甲酸酯类化合物）
3.2 邻苯二甲酸二甲酯、邻苯二甲酸二乙酯、邻苯二甲酸二正丙酯、邻苯二甲酸丁基苄酯、邻苯二甲酸二正丁酯、邻苯二甲酸二正戊酯、邻苯二甲酸二环己酯、邻苯二甲酸二正己酯、邻苯二甲酸二异辛酯、邻苯二甲酸二正辛酯（纯度>97.5%）。
3.3 混合标准储备溶液（r=1 000mg/l）：分别称取10种邻苯二甲酸酯类化合物标准品0.05g（精确到0.1mg），用甲醇（3.1）溶解，移入50 ml容量瓶中，定容，摇匀，配成质量浓度为1 000mg/l的混合标准溶液。
4 仪器
4.1 高效液相色谱仪，具有二极管阵列检测器，配色谱工作站。
4.2 微量进样器或自动进样装置。
4.3 超声波清洗器。
4.4 高速离心机。
4.5 电子天平。
5 分析步骤
5.1 样品预处理
称取样品约1g（精确至1mg）于10ml具塞刻度管中，加入甲醇（3.1）至刻度，振摇，超声提取20min，必要时可高速离心。经0.45mm滤膜过滤，滤液作为待测样液备用。
5.2 测定
5.2.1 色谱参考条件
5.2.1.1 色谱柱：c18 柱，250mm×4.6mm，5mm。
5.2.1.2 流动相：a相：甲醇，b相：水，梯度洗脱，洗脱程序见表2。
5.2.1.3 流速：1.0ml/min。
5.2.1.4 检测器：二极管阵列检测器，检测波长为280nm。
5.2.1.5 柱温：25℃或室温（无温控装置时适用）。
表2 流动相甲醇和水梯度洗脱程序（体积比）
|
时间 / min |
0 |
12 |
15 |
22 |
23 |
25 |
|
甲醇＋水 |
75＋25 |
75＋25 |
100＋0 |
100＋0 |
75＋25 |
75＋25 |
5.2.2 校准曲线的制备
移取邻苯二甲酸酯类化合物标准储备溶液（3.3）0ml、1.00ml、2.00ml、4.00ml、6.00ml、8.00ml于10ml具塞刻度管中，用甲醇（3.1）稀释至刻度，摇匀。此时溶液中各组分浓度分别为0 mg/l、100 mg/l、200 mg/l、400 mg/l、600 mg/l和800 mg/l。在设定色谱条件下，分别取5ml进行hplc分析。根据标准系列质量浓度和峰面积，绘制校准曲线。
5.2.3 样品测定
在设定色谱条件下，进5ml待测样液进行高效液相色谱分析。若样品中待测组分含量过高，应用甲醇稀释后测定。色谱图检出的物质，经与该物质的标准紫外光谱图比较确证后，根据峰面积，从校准曲线上查得相应组分的质量浓度。
5.3 空白试验
除不称取样品外，按以上步骤进行。
5.4 平行试验
按以上步骤，做两份样品的平行测定。
6 结果计算
r ´ v
w（邻苯二甲酸酯）= --------------------------
m
式中：w（邻苯二甲酸酯）--化妆品中邻苯二甲酸酯的质量分数，mg/g；
r --从校准曲线上查得的待测样液中邻苯二甲酸酯的质量浓度，mg/l；
v --样品定容体积，ml；
m --样品用量，g。
7 色谱图（略）
8 阳性结果的确认
测定过程中如果有阳性结果，可采用气相色谱-质谱法、液相色谱-质谱法等进一步确证。
气相色谱参考条件：
色谱柱：hp-5ms或类似石英毛细管柱（30m×0.25mm i.d.，0.25mm）；进样口温度：250℃；色谱与质谱接口温度：280℃；柱温：程序升温，初始温度60℃（1min），以20℃/min上升至220℃（1min），再以5℃/min上升至280℃（4min）；载气：高纯氦气，流速1.0ml/min；进样方式：不分流进样，进样量：1.0ml。
质谱参考条件：
电离方式：电子轰击（ei）源；电离能量：70ev；溶剂延迟：5min；扫描方式：选择离子扫描（sim）
9 精密度
在重复性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于这两次测定值的算术平均值的10%。
附录 邻苯二甲酸酯类化合物的信息表
|
序号 |
中文名称 |
英文名称 |
cas no. |
英文缩写 |
化妆品禁用组分 |
纳入《国际化妆品原料标准中文名称目录》 |
|
1 |
邻苯二甲酸二甲酯 |
dimethyl phthalate |
131-11-3 |
dmp |
/ |
《国际化妆品原料标准中文名称目录》3345号 |
|
2 |
邻苯二甲酸二乙酯 |
diethyl phthalate |
84-66-2 |
dep |
/ |
《国际化妆品原料标准中文名称目录》3084号 |
|
3 |
邻苯二甲酸二正丙酯 |
dipropyl phthalate |
131-16-8 |
dpp |
/ |
/ |
|
4 |
邻苯二甲酸二正丁酯 |
dibutyl phthalate |
84-74-2 |
dbp |
《化妆品卫生规范》（2007年版） 表2（1） 411号 |
《国际化妆品原料标准中文名称目录》2985号 |
|
5 |
邻苯二甲酸二正戊酯 |
diamyl phthalate |
131-18-0 |
dap |
《化妆品卫生规范》（2007年版） 表2（1） 15号 |
/ |
|
6 |
邻苯二甲酸二正己酯 |
dihexyl phthalate |
84-75-3 |
dhp |
/ |
/ |
|
7 |
邻苯二甲酸丁基苄酯 |
benzyl butyl phthalate |
85-68-7 |
bbp |
《化妆品卫生规范》（2007年版） 表2（1） 281号 |
《国际化妆品原料标准中文名称目录》1265号 |
|
8 |
邻苯二甲酸二环己酯 |
dicyclohexyl phthalate |
84-61-7 |
dchp |
/ |
/ |
|
9 |
邻苯二甲酸双（1-辛基）酯 |
bis（1-octyl）phthalate |
117-84-0 |
dop |
/ |
/ |
|
10 |
邻苯二甲酸双（2-乙基己基）酯 |
bis（2-ethylhexyl）phthalate |
117-81-7 |
dehp |
《化妆品卫生规范》（2007年版） 表2（1） 289号 |
《国际化妆品原料标准中文名称目录》3076号 |
