海洋生物质量监测技术规程

目 次
1 范围
2 规范性引用文件
3 监测方案设计
3.1 测站布设
3.2 监测项目
4 样品采集、贮存、运输与处理
4.1 样品采集
4.2 现场样品采集
4.3 采样工具及试剂
4.4 采样现场描述与样品登记编号
4.5 样品的保存与运输
4.6 样品制备
4.7 质量保证
5 样品测定方法
6 海洋生物质量评价与报告格式
6.1 评价参数
6.2 评价标准
6.3 评价方法
6.4 海洋生物质量评价
6.5 监测报告编写
附录A (规范性附录) 海洋生物样品采集登记
附录B (规范性附录) 海洋生物标本标签
附录C (规范性附录) 海洋生物质量监测样品测定方法
附录D (规范性附录) 海洋生物质量评价标准值
附录E (规范性附录) 海洋生物质量监测结果报表
附录F (规范性附录) 海洋生物质量污染指数
附录G (规范性附录) 海洋生物质量监测报告内容与格式
　　1　范围
   本规程规定了海洋生物质量监测的内容、技术要求和方法。
   本规程适用于中华人民共和国内海、领海、毗连区、专属经济区、大陆架以及中华人民共和国管辖的其它海域所进行的海洋生物质量监测工作。
   2　规范性引用文件
   下列文件中的条款通过本规程的引用而成为本规程的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本规程，然而，鼓励根据本规程达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本规程。
   GB 3097 海水水质标准
   GB 17378.2 海洋监测规范 数据处理与分析质量控制
   GB 17378.3 海洋监测规范 样品采集、贮存与运输
   GB 17378.6 海洋监测规范 生物体分析
   GB 17378.7 海洋监测规范 近海污染生态调查和生物监测
   GB 18421 海洋生物质量
   3　监测方案设计
   海洋生物质量监测以贝类为主(选择生物质量监测种类的顺序依次为贻贝、牡蛎和菲律宾蛤)，根据海区(滩涂)特征可增选鱼、虾和藻类作为监测生物。
   3.1　测站布设
   3.1.1　布设原则
　　　—— 监测站的布设应覆盖或代表监测海域(滩涂)生物质量，样品采自潮间带、潮下带和外海海域；
　　—— 依据监测海域(滩涂)范围，以最少数量测站，所获取的数据能够满足监测目的需要；
　　—— 尽可能沿用历史测站，尽量使监测站位与沉积物污染调查站位一致；
　　—— 不同类型滩涂、增养殖海区，测站布设应有所不同，采样站位尽可能避开污染源；
　　—— 应考虑监测海域(滩涂)的水动力状况和功能，开阔海区，测站可适当减少，半封闭或封闭海区，测站可适当加密。
　　3.1.2　布站方法
   具体站位布设应根据实际情况，以覆盖和代表监测海域(滩涂)生物质量为原则，可采用扇型(河口近岸海域)或井字型、梅花型、网格型方法布设控制断面和监测站位。
   3.1.3　监测频率和时间
   根据各地的具体情况，在生物成熟期(8月—10月)进行一次生物质量监测，不同年份的采样时间应保持不变。
   3.2　监测项目
   海洋生物质量监测必测项目为：石油烃、总汞(Hg)、镉(Cd)、铅(Pb)、砷(As)、六六六、滴滴涕(DDTs)、多氯联苯(PCBs)、粪大肠菌群、异养菌总数量。
   4　样品采集、贮存、运输与处理
   4.1　样品采集
   4.1.1　生物残毒样品
　　—— 潮间带测站定点采集的贝类；
　　—— 沿岸潮下带和外海海域的贝类、鱼、虾、藻类样品在就地养殖场、渔船、渔港采集，须注明样品采集的地点、时间，并由海洋监测专业人员采集。
　　4.1.2　赤潮生物、细菌学指标样品
　　—— 赤潮生物；
　　—— 异养菌；
　　—— 粪大肠菌群。
　　4.1.3　贝毒样品
   贝毒样品采集同生物残毒样品。
   4.2　现场样品采集
   现场采集样品，一定要保持生物个体不受损伤。栖息在岩石或其它附着物上的生物个体，要用凿子铲取。栖息在沙底或泥底中的生物个体可用铲子采取，或铁钩子扒取。在选取生物样品时要去掉壳碎的或损伤的个体(指机械损伤)，但在特殊情况下(如溢油或其它事故)，对采集的生物样品不能丢掉，保存起来，带回实验室分析其原因。要挑选完好的生物个体，每种样品必须选择大小相近的个体，记录其体长(贝类应记录壳长、壳高和壳宽)。现场无法确定生物种名时，需将该样品放在广口玻璃瓶中(2～3个个体)，用5％福尔马林溶液或70％酒精溶液保存，待实验室进一步鉴定。
   在养殖场、渔船、渔港采集或选取样品时，原则同上。
   4.2.1　贝类样品的采集
   挑选采集体长大致相似的个体约1.5Kg。如果壳上有附着物，应用不锈钢刀或比较硬的毛刷剥掉，彼此相连个体应用不锈钢小刀分开。用现场海水冲洗干净后，放入双层聚乙烯袋中冰冻保存(-10℃～-20℃)，用于生物残毒及贝毒检测。
   4.2.2　藻类样品的采集
   采集大型藻类样品100g左右，用现场海水冲洗干净，放入双层聚乙烯袋中冰冻保存(-10℃～-20℃)。
   4.2.3　检测细菌学指标(粪大肠菌群、异养细菌)样品的采集
   检测细菌学指标的生物样品，应现场用凿子铲取栖息在岩石或其它附着物上的生物个体。栖息在沙底或泥底中的生物个体可用铲子采取，或铁钩子扒取。在选取生物样品时要去掉壳碎的或损伤的个体(指机械损伤)，将无损伤、生物活力强的个体装入做好标记的一次性塑料袋中。然后将样品放入冰瓶冷藏(0℃-4℃)保存不得超过24h，全过程严格无菌操作。
   4.2.4　虾、鱼类样品的采集
   虾、鱼类等生物的取样量为1.5kg左右，为了保证样品的代表性和分析用量，应视生物个体大小确定生物的个体数，保证选取足够数量(一般需要100g肌肉组织)的完好样品用于分析测定。用现场海水冲洗干净，冰冻保存(-10℃～-20℃)。
   4.3　采样工具及试剂
   4.3.1　采样工具
   用帆布制作双肩背的背包，应配备以下工具：
　　—— 铁锨(控取栖息在泥沙中的动物)；
　　—— 铁把手(采集栖息在浅层泥沙中的贝类)；
　　—— 凿子(采集栖息在岩石或岩石缝隙内的动物，如牡蛎等)；
　　—— 解剖不锈钢刀(各种类型镊子及剪不锈钢刀)；
　　—— 冰瓶(保存样品)；
　　—— 组织捣碎机(样品匀浆)；
　　—— 医用酒精棉球；
　　—— 一次性塑料袋；
　　—— 一次性乳胶手套；
　　—— 广口玻璃瓶、聚乙烯袋、纱布、卡尺、记录本、记号笔等。
　　4.3.2　试剂
　　—— 70％酒精(取市售 95％的酒精 70mL，加 25mL蒸馏水)；
　　—— 5％福尔马林(取市售 40％的甲醛水溶液5mL，加入95 mL蒸馏水或海水)；
　　—— 碘液(2g碘化钾加 1g碘溶于200mL蒸馏水)。
　　4.4　采样现场描述与样品登记编号
   4.4.1　采样现场(环境)描述
   野外采样时，要做好观察和记录。采样时，应注意观察生物个体的颜色、个体大小、死亡数量、机械损伤或其它异常个体，记录生物个体生活的环境等。
   生物样品的名称一律用学名和拉丁名同时记录。
   4.4.2　样品登记编号
   样品采集后，将样品按照登记簿的顺序编号填写(见附录A表1)。同时还要按照登记簿上的号数、日期、写一纸签或竹签(见附录B表2)放入瓶内或袋内，并在瓶或袋外编上号数，以防差错。记录时用铅笔，不能用墨水笔和圆珠笔。
   4.5　样品的保存与运输
   4.5.1　样品的运输
   样品采集后，若长途运输，需把样品放入样品箱(或塑料桶)中，对无须封装的样品应将现场清洁海水淋洒在样品上，保持样品润湿状(不得浸入水中)。若样品处理，须在采样24h后进行，可将样品放在聚乙烯袋中，压出袋内空气，将袋口打结．将此袋和样品标签一起放入另一聚乙烯袋(或洁净的广口玻璃瓶)中，封口、冷冻保存。
   4.5.2　样品的保存
   样品运输前，应根据采样记录和样品登记表清点样品，填好装箱单和送样单，由专人负责，将样品送回实验室冷冻保存。
   生物残毒和贝毒检测样品应保存在-20℃以下的冰柜中。
   微生物检测样品运回实验室后，应立即进行检测。
   4.6　样品制备
   4.6.1　贝类样品的制备
   将贝类样品解冻后，用蒸馏水或清洁海水漂洗每一个个体，并使其自然风干。用卡尺测定每一个贝类的体长(从壳前缘至后缘的距离)，称重量．并记录。有足丝的贝类需将足丝拉出，用于分析石油烃、六六六、滴滴涕(DDTs)、多氯联苯(PCBs)、粪大肠菌群、异养菌总数量、腹泻性贝毒(DSP)、麻痹性贝毒(PSP)的样品，可用不锈钢刀切开闭壳肌清除体内杂物，用镊子或竹签取出柔软组织(不得丢失体液)将多个个体合并匀浆，放入广口玻璃瓶中密封，冰冻保存。
   用于分析总汞、镉、铅、砷的生物样品，须用竹签或有机塑料板取出柔软组织(不得丢失体液)，将多个个体合并匀浆，放入聚乙烯袋中密封，冰冻保存。
   4.6.2　虾样制备
   将样品解冻后，用蒸馏水或清洁海水漂洗每一个个体并风干。测定并记录每一个体体长和重量，然后用不锈钢刀将腹部与头胸部及尾部分开，小心取出内脏，切除腿。用于分析石油烃、六六六(666)、滴滴涕(DDTs)、多氯联苯(PCBs)、粪大肠菌群、异养菌总数量、腹泻性贝毒(DSP)、麻痹性贝毒(PSP)的样品，用不锈钢刀沿腹部外甲边缘切开，用镊子或竹签取下内侧的外甲并弃去，用另一把不锈钢刀搅动腹部肌肉，并用镊子或竹签取出肌肉，将多个个体合并匀浆，放入广口玻璃瓶中密封，冰冻保存。
   用于分析总汞、镉、铅、砷的生物样品，须用竹签或有机塑料板取出肌肉。按此法取出多个个体的肌肉，将多个个体合并匀浆，放入聚乙烯袋中密封，冰冻保存。
   4.6.3　鱼样制备
   取解冻并清洗好的个体样品，测定鱼的叉长(从头至尾鳍的长度)并称重。中、小型鱼样，需逐个测量与称重。然后用不锈钢刀切除胸鳍并切开背鳍附近自头至尾部的鱼皮，在鱼鳃附近和尾部，横过鱼体各切一不锈钢刀，在鱼腹部，鳃和尾部两侧各切一不锈钢刀(均切在鱼体一侧，但不得切得太深，以免切开内脏，沾污肉片)。然后将鱼皮和肉分开，谨防外表皮沾污肉片，用另一把不锈钢刀将肌肉与脊椎分离，用于分析石油烃、六六六(666)、滴滴涕(DDTs)、多氯联苯(PCBs)、粪大肠菌群、异养菌总数量、腹泻性贝毒(DSP)、麻痹性贝毒(PSP)，用镊子或竹签取出用镊子将肌肉取出。若一侧肌肉不足，用同样方法取出另一侧肌肉。将足够分析测定用的鱼样合并匀浆后放入广口玻璃瓶中封闭，冰冻保存。
   用于分析总汞、镉、铅、砷的生物样品，须用竹签或有机塑料板取出用镊子将肌肉取出。若一侧肌肉不足，用同样方法取出另一侧肌肉。将足够分析测定用的鱼样合并匀浆后放入聚乙烯袋中封闭，冰冻保存。
   4.6.4　藻类样制备
   取藻类样品清洗干净后，除去根和末稍，切成段(或细条)，然后在组织捣碎机中匀浆后，放入广口玻璃瓶中密封，冰冻保存。
   4.7　质量保证
   4.7.1　样品采集、运输、贮存的质量保证
　　—— 制定一个科学的采样计划，选择合理的采样地点、采样时间和采样方法，确保采样的代表性；
　　—— 严格各类样品采集、取样、包装、运输和储存的一切器具的选择及按规定清洗，防止样品被沾污；
　　—— 测定样品时，要单独使用分样，测定完毕后，剩余样品不可再用；
　　—— 过滤膜和相关设备必须保持清洁，用酸和其它洗涤剂清洗；
　　—— 消过毒的瓶子必须保持在灭菌状态直到样品采集。消毒纸或铝箔失效，或顶部封口破裂，则弃之；
　　—— 样品保存或运输过程中要冰冻保存，不得放在水中。
　　4.7.2　样品测定的质量保证
   海洋生物样品测定中的质量保证应遵照GB 17378.2 海洋监测规范 数据处理与分析质量控制；GB 17378.6海洋监测规范 生物体分析；GB 17378.7 海洋监测规范 近海污染生态调查和生物监测的规定。
   5　样品测定方法
   海洋生物质量监测样品测定方法应遵照附录C的规定。
   6　海洋生物质量评价与报告格式
   6.1　评价参数
   海洋生物质量评价参数为：石油烃、总汞、镉、铅、砷、六六六、滴滴涕(DDTs)、多氯联苯(PCBs)、粪大肠菌群、异养菌总数量、腹泻性贝毒(DSP)、麻痹性贝毒(PSP)。
   6.2　评价标准
   海洋生物质量评价标准值应遵照附录D的规定。
   6.4　评价方法
   海洋生物质量评价方法采用单因子污染指数评价法(仅适用于同一测站)：
   Ii=Ci/Sij…………………………………………………………………………………………(1)
   式中Ii—i测项的污染指数(单因子污染指数的计算值列入附录F表6)，
   Ci—i测项的浓度值或指标值(选取附录E表5中的测值)，
   Sij—i测项的j类生物质量标准值(选取附录D表4中的标准值)。
   6.5　海洋生物质量评价
   海洋生物质量评价应依据被评价海区的主体功能，按照GB18421《海洋生物质量》选择评价标准。
   海洋生物质量评价以单因子污染指数1.0作为该因子是否对生物产生污染的基本分界线，小于0.5为生物未受该因子污染，0.5～1.0之间为生物受到该因子污染，大于1.0表明生物已受到该因子污染。
   6.6　监测报告编写
   海洋生物质量监测报告编写应遵照附录G的规定。

附　录　A
(规范性附录)
海洋生物样品采集登记
　　　海洋生物质量监测的海洋生物样品采集应按表A1的要求填写登记表。
表A1 海洋生物样品采集登记表
编号　　　　　　　　　　　 　　　　日期
产地(站号)
种名
地方名
色泽 个数
附注：
附　录　B
(规范性附录)
海洋生物标本标签
　　　用于海洋生物质量监测的生物样品应按表B1的要求填写标本标签。
表B1 海洋生物标本标签
采集号 　　　　　　　　　　日期
种名
产地(站号)
采集者
附　录　C
(规范性附录)
海洋生物质量监测样品测定方法
　　　海洋生物质量监测样品的测定方法应满足表C1的要求。
表C1 海洋生物质量监测样品测定方法
序号
分析项目
测定方法
引用标准或文件
1
石油烃 紫外分光光度法 GB 17378.6海洋监测规范，生物体分析
2
总汞 原子荧光法 GB 17378海洋监测规范
3
镉 无火焰原子吸收分光光度法 GB 17378.6海洋监测规范，生物体分析
4
铅 无火焰原子吸收分光光度法 GB 17378.6海洋监测规范，生物体分析
5
砷 原子荧光法 GB 17378海洋监测规范
6
六六六 气相色谱法 GB 17378.6海洋监测规范，生物体分析
7
滴滴涕(DDTs) 气相色谱法 GB 17378.6海洋监测规范，生物体分析
8
多氯联苯(PCBs) 气相色谱法 GB 17378.6海洋监测规范，生物体分析
9
粪大肠菌群 发酵法 GB 17378.7海洋监测规范，近海污染生态调查和生物监测
10
异养菌总数量 平板计数法 GB 17378.7海洋监测规范，近海污染生态调查和生物监测
11
腹泻性贝毒(DSP) 小鼠检测法、高效液相色谱法 《海洋赤潮监测技术规程》
12
麻痹性贝毒(PSP) 小鼠检测法、高效液相色谱法 GB 17378.7海洋监测规范，近海污染生态调查和生物监测、《海洋赤潮监测技术规程》
附　录　D
(规范性附录)
海洋生物质量评价标准值
　　　海洋生物质量评价标准值见表D1。
表D1 海洋生物质量评价标准值表
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　单位：mg/kg(鲜重)
序号
项目
第一类
第二类
第三类
引用标准
1 石油烃 15
50
80
GB 18421-2001
2 总汞 0.05
0.10
0.30
GB 18421-2001
3 镉 0.2
2.0
5.0
GB 18421-2001
4 铅 0.1
2.0
6.0
GB 18421-2001
5 砷 1.0
5.0
8.0
GB 18421-2001
6 六六六(666) 0.02
0.15
0.50
GB 18421-2001
7 滴滴涕(DDTs) 0.01
0.10
0.50
GB 18421-2001
8 多氯联苯(PCBs) 0.1
International Joint Commission Aquatic Life Guideline
9 粪大肠菌群(个/kg) 3000
5000
—
GB 18421-2001
10 异养菌总数量 —
—
—
待定
11 腹泻性贝毒(DSP) 200
海洋赤潮监测技术规程
12 麻痹性贝毒(PSP) 0.8
GB 18421-2001
注：
　i. 以贝类去壳部分的鲜重计。
　ii. 六六六含量为四种异构体总和。
　iii. 滴滴涕含量为四种异构体总和。
附　录　E
(规范性附录)
海洋生物质量监测结果报表
　　　海洋生物质量监测结果应按照表E1的内容填写。
表E1 海洋生物质量监测结果报表
　　　　　　　采样时间： 　　　　样品分析时间： 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　第　　　　页
站号
样品
名称
总汞
10-6
镉
10-6
铅
10-6
砷
10-6
666
10-9
DDT
10-9
PCB
10-9
石油烃
10-6
PSP
10-9
DSP
10-9
粪大肠菌群
个/g湿重
异养细菌
cfu/g湿重?? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ??
　　　　　　　　　　　　分析者　　　　计算者　　　 　校对者
附　录　F
(规范性附录)
海洋生物质量污染指数
　　　海洋生物质量污染因子的污染指数应按照表F1的要求填写、计算。
表F1 海洋生物质量污染指数表
　　　　　　　计算时间　　　年　　月　　日 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　第　　 页
样品
编号
样品
名称
总汞
镉
铅
砷
666
DDT
PCB
石油烃
PSP
DSP
粪大肠菌群
异养菌? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ??
最大值 ??　 ??　 ??　 ??　 ?? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ??
最小值 ?? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ??
平均值 ?? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ??
注：本表栏目视需要可增减
附　录　G
(规范性附录)
海洋生物质量监测报告内容与格式
G.1文本格式
　　G.1.1　文本规格
　　　海洋生物质量监测报告文本外形尺寸为A4(210mm×297mm)。
　　G.1.2　封面格式
　　　海洋生物质量监测报告封面格式如下。
　　　第一行书写：×××海区或省市×××海域(一号宋体，加黑，居中)；
　　　第二行书写：海洋生物质量监测报告(一号宋体，加黑，居中)；
　　　落款书写：编制单位全称(如有多个单位可逐一列入，三号宋体，加黑，居中)；
　　　第四行书写：××××年××月(小三号宋体，加黑，居中)；
　　　第五行书写：中国，空一格，××(地名，小三号宋体，加黑，居中)；
　　　以上各行间距应适宜，保持封面美观。
　　G.1.3　封里一内容
　　　封里一中应分行写明：监测项目实施单位全称(加盖公章)；项目负责人、技术总负责人、分项目负责人和主要参加人员姓名；报告书编制单位全称(加盖公章)；编制人、审核人姓名；编制单位地址；通信地址；邮政编码；联系人姓名；联系电话；E-mail地址等内容。
G.2　海洋生物质量监测报告章节内容
　　　海洋生物质量监测报告应包括以下全部或部分内容。依据监测目的、内容和具体要求，可对下列章节及内容适当增减。
　　G.2.1　前言
　　　主要包括海洋生物质量监测工作任务来源、监测任务实施单位、监测时间与航次、监测船只与合作单位等的简要说明。
　　G.2.2　监测方案
　　G.2.2.1　监测海区的区域与范围
　　G.2.2.2　监测站位布设
　　G.2.2.2.1　监测站位图
　　G.2.2.2.2　监测站位类型与说明
　　G.2.2.3　监测时间与频率
　　G.2.3　监测内容与检测分析
　　　生物质量监测项目为：石油烃、总汞、镉、铅、砷、六六六(666)、滴滴涕(DDTs)、多氯联苯(PCBs)、粪大肠菌群、异养菌总数量、腹泻性贝毒(DSP)、麻痹性贝毒(PSP)。
　　G.2.4　评价
　　　生物质量评价采用单因子污染指数法。
　　G.2.5　生物质量监测结果的综合分析与评价
　　G.2.5.1　监测海区的生物质量现状的分析与评价
　　G.2.5.2　监测海区生物质量发展趋势的分析与预测
　　G.2.5.3　对监测海区生物质量管理的措施与建议
　　G.2.6　监测数据报表
　　　海洋生物质量监测数据报表见附录E(表5 海洋生物质量监测结果报表)和附录F(表6 海洋生物质量项污染因子的污染指数)等。
　　　其它的附图、附表、附件(含参考文献)等。
　　本规程由国家海洋局海洋环境保护司第一次提出。
　　本规程起草单位：国家海洋环境监测中心。
　　本规程主要起草人：徐恒振、刘现明、周传光、马永安。